PCR (polümeraasi ahelreaktsioon) testimine on molekulaardiagnostika põhitehnoloogia. Selle pakendi- ja testimisprotsesside standardimine mõjutab otseselt tulemuste täpsust ja biosfekti. See artikkel annab professionaalse vaatenurga peamistele kvaliteedikontrolli punktidele kogu PCR -testimisprotsessis.
Proovide kättesaamine ja eeltöötlus on protsessi esimesed sammud. Laborid peavad proovide terviklikkuse tagamiseks rangelt kontrollima valimi tuvastamist, transporditingimusi ja säilitusaega. Pärast kättesaamist tuleb proovid nummerdada ja registreerida bioohutuse kapis ning läbima eeltöötlemise protseduure, näiteks lüüs ja nukleiinhappe ekstraheerimine katsetüübi põhjal. Selle etapi jooksul on ristsaastumise vältimiseks vajalik kahe inimese kontrollimissüsteem.
PCR -reaktsioonisüsteemi ettevalmistamine tuleb läbi viia puhta pingi piires. Operaatorid peavad kandma 3. taseme kaitsevarustust ja kasutama nukleaasivabasid tarbekausta. Reaktiivi ettevalmistamine järgib põhimõtet "ühesuunaline töövoog", liikudes reagendi ettevalmistamise piirkonnast proovi töötlemispiirkonda ja seejärel võimenduspiirkonda. Eksperimentaalse kehtivuse jälgimiseks tuleb igasse reaktsioonipartiisse lisada negatiivsed kontrollid, positiivsed kontrollid ja sisekontrollid.
Amplifikatsiooni- ja testimisfaasis tuleb PCR-instrument olla eelkalibreeritud ja temperatuuri tsükli parameetrid kontrollitud. Reaktsiooniprotseduur hõlmab tavaliselt kolme etappi: denatureerimine (94–95 kraad), lõõmutamine (50–65 kraad) ja pikendus (72 kraadi). Tsüklite arvu reguleeritakse tuvastamise sihtmärgi põhjal. Reaalajas fluorestsents PCR nõuab ka konkreetsete kanalite fluorestsentsisignaali läve jälgimist.
Tulemuste analüüsi ja aruandlust peavad tegema kvalifitseeritud tehnikud. Amplifikatsioonkõvera morfoloogia, CT väärtuse usutavuse ja kvaliteedikontrolli materjalide vastavuse standarditega peavad üle vaatama vähemalt kaks spetsialisti töötlemata andmeid. Lõpparuanne peaks sisaldama teavet testi metoodika kohta, tulemuste tõlgendamise alust ja testipiirangute avaldust.
Kogu protsess järgib rangelt ISO 15189 ja asjakohaseid CDC spetsifikatsioone. PCR -testimise usaldusväärsuse ja jälgitavuse tagamiseks rakendatakse keskkonnaseire, seadmete hooldamise ja personalikoolituse kolmekordne garantii süsteem.