Polümeraasi ahelreaktsiooni (PCR) katsetes mõjutab reagentide ja proovide pakendamine otseselt eksperimentaalsete tulemuste täpsust ja ohutust. PCR -i standardsed pakendiprotseduurid peavad rangelt järgima steriilsuse, saastumise ennetamise ja selge märgistamise põhimõtteid. Konkreetsed protseduurid on toodud allpool.
1. Ettevalmistus
Enne jätkamist kandke puhta keskkonna tagamiseks labori mantel, kindad ja maski (soovitatav on puhas pink või biosfektne kapp). Kontrollige, kas kõik tarbivad tooted (nt tsentrifuugi torud, PCR -plaadid) pole DNase/RNaasi saastumist ja kasutage autoklaavitud või ensüümi - tasuta steriliseerijad. Reaktiivid (nt praimerid, matriitsi DNA, ensüümid jne) tuleks alikvootiga üksikute viaalideks, et vältida korduvat külmutamist - sula tsüklit.
2. alikvoot ja märgistamine
Alikvootidega reagendid: kasutage pipeti, et väljastada põhisegu, praimerid jne. Tsentrifuugi torudesse või PCR -plaadi kaevudesse vastavalt eksperimentaalsetele vajadustele, eraldades iga mahu täpselt lähima mikroliitrit. Rist - saastumise vältimiseks kasutage ühekordselt kasutatavaid pipetiotsid.
Märgistamisstandardid: Kõik konteinerid peavad olema selgelt märgistatud nime, kontsentratsiooni, kuupäeva ja operaatori numbriga. Loematu märgistuse vältimiseks on soovitatav veekindlad sildid või otsene graveering.
3. pakend ja tihendamine
Pärast alikvootipingutamist pingutage kohe tsentrifuugitoru korgid või sulgege PCR -plaadid (kasutades soojust - tihenduskile või spetsialiseeritud kleepkile) lekke vältimiseks. Pika - termini salvestusruumi jaoks on soovitatav paigutada pakend suletud kotti ja lisada kuiva keskkonna säilitamiseks kuivatusaine (näiteks ränidioksiidigeeli helmed).
4. ladustamine ja transport
Pärast pakendamist tuleks PCR-reaktiive salvestada eraldi temperatuuril - 20 kraadi (pikk - termin) või 4 kraadi (lühiajaline), et vältida temperatuuri kõikumisi. Transport tuleks läbi viia isoleeritud anumas, mis on täidetud polsterdusmaterjaliga, et vältida šokki ja lekkeid. Bioharjade proovide korral on vaja järgida bioohutuse pakendamise nõudeid vastavalt ÜRO 3373 või asjakohastele määrustele.
Standardiseeritud PCR -pakendiprotseduurid on eksperimentaalse töökindluse jaoks hädavajalikud. Range aseptiline kontroll ja selge märgistamine võivad tõhusalt vähendada saastumisriske ja tagada andmete täpsuse.
